鹿茸多肽是一种小分子、分子量在1,000~50,000之间,活性强、便于吸收、副作用小的蛋白。经研究,鹿茸多肽具有抗炎、抗氧化、增强免疫并能促进细胞分化、伤口愈合、抑制肿瘤细胞、促进神经系统、周围神经系统的再生等药理作用,因此对鹿茸多肽的研究具有越来越重要的意义。而如何高效提取破碎鹿茸多肽是进行鹿茸多肽研究的必要前提,于是净信超声波细胞破碎仪便成功参与破碎工作。
据我国《本草纲目》中记载:鹿茸具有补肾壮阳、强筋健骨、生精益血等功效。鹿茸是一种特殊的软骨组织,含有多种活性因子。现代医学表明,鹿茸的化学成分较为复杂、其中含有大量的氨基酸、多肽、蛋白质、无机元素等成分,而蛋白质成分高达55.26%,更加证明鹿茸多肽是其主要的生物活性成分物质。
二、鹿茸多肽常见的提取方法
1、 有机溶剂萃取法
利用提取物在两种互不相容的试剂中分配系数不同,使用有机溶剂萃取剂来提取鹿茸中的蛋白质及多肽有效成分。
2、 裂解液法
通过裂解液使细胞组织快速破裂的方法。
3、 酶解法
酶解法是利用活性酶来水解特定的某种物质。在实验中,通过对酶的种类和反应的时间与温度以及氢离子浓度指数等等多方面控制,从而进行有效的提取。
4、 匀浆法
将含一定量水的样品与提取溶剂在匀浆提取装置中混合匀浆,通过机械及液力剪切作用将物料撕裂和粉碎,使物料破碎和有效成分的提取同步进行,实现有效成分快速、强化提取的目的。
5、 超声波萃取法
超声波萃取是使用超声波萃取机,利用超声波辐射压强产生的强烈空化应效应、机械振动、扰动效应、高的加速度、乳化、扩散、击碎和搅拌作用等多级效应,增大物质分子运动频率和速度,增加溶剂穿透力,从而加速目标成分进入溶剂,促进提取进行的成熟萃取技术。
三、常见的五种提取方法优劣势比较
1、有机溶剂萃取法:
优势:有机溶剂分布广泛;价格低且利于回收;鹿茸多肽能溶解于有机溶剂之中。
劣势:有机溶剂易引起蛋白质的变性和失活;要求在低温环境下进行,控制有难度;成本较高;;提取率较低。
2、裂解液法
优势:成本低,时间短,提取率较高。
劣势:溶剂有毒,引起蛋白降解,会失去活性;后续除杂过程复杂,步骤繁琐,不利于后续研究。
3、酶解法
优势:提取率较高;提取物纯度更高,活性更好。
劣势:酶作用中需要控制的条件较多,如酶的种类选取、反应温度、时间、加酶量、PH等。
4、匀浆法
优势:提取率较高,成本低。
劣势:耗时长。
5、超声波萃取法
优势:提取率和质量均较高,操作简易,耗时短,安全性高,成本低。
劣势:对超声波敏感的提取物需慎用,空化作用会产生活性氧,需要
安全性高; 加一些巯基保护剂。
四、匀浆法和超声波萃取法对比研究
1、 匀浆法和超声波萃取法步骤
匀浆法
1、称取新鲜的梅花鹿茸约100g,剁成小块,粉碎机粉碎后放入烧杯中,用预先放于层析柜(4℃)中冷却过的蒸馏水冲洗数次,直至完全无血色;
2、加入预冷的匀浆液(pH值3.5的冰醋酸溶液)1 000 ml
3、胶体磨匀浆6 h
4、不同时间间隔吸取混合匀浆液5 mL,于4℃,以10 000 r/min 的转速离心15 min后吸取上清液,标号后,保存于4 ℃中待测
超声波萃取法(1/2/4与匀浆法相同):冰浴条件下超声破碎(工作5s ,停止 3 s)
2、 结果
依照统计学方法对以上匀浆法和超声波萃取法实验步骤每组数据均测定 3 次,并计算平均值,求 3 个数据的 SD(相对标准偏差)。
实验结果非常明显,采用超声波萃取法处理的鹿茸在20mins时,浓度就达到了1.25mg/mL,而在40mins到80mins过程中,浓度增大不明显,几乎已达到最高值。
而采用匀浆法测蛋白浓度结果(如图表),鹿茸蛋白的浓度随着匀浆时间的延长升高得比较缓慢,当匀浆 6 h 后,鹿茸蛋白的浓度仅为 0.42 mg/mL。
五、超声波细胞破碎仪萃取法提取鹿茸多肽总结
上述实验表明,采用超声波萃取的方法提取鹿茸多肽更具优势:
(1)节约时间,效率高。一小时内提取效率是匀浆法的10倍不止,且超声萃取时长在40分钟时相对获得率最高;
(2)提取获得率高。相对于匀浆法而言,超声稳定期提取获得率大约是匀浆法的4倍左右。
六、细胞粉碎仪产品介绍
超声波细胞粉碎机由超声波发生器和换能器二大部分组成。主要工作原理是利用超声波在液体中的分散效应,使液体产生空化的作用,从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。
特点优势:采用PWM控制电源,工作时间、功率连续可调,适用范围更广;采用7寸TFT高分辨率触摸屏显示;采用精度更高更智能的中央微机集中控制;样品温度自动检测显示功能、功率显示微机跟踪、故障自动报警;隔音装置采用钣金、喷塑、ABS材质,模具化设计,带门锁功能;应用范围也很广泛,支持土壤岩石样品的均质、分散和提取;细胞、病毒、孢子的裂解和破碎;纳米材料的分散、裂解等。
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